外周血淋巴细胞培养基
【检验原理】
在正常情况下,人外周血中是没有分裂相的,只有在异常情况下才能发现。植物血球凝集素(PHA)是人类淋巴细胞有丝分裂的刺激剂,在PHA作用下,原处于G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞,进而进行有丝分裂。利用PHA这一特性,淋巴细胞经过含有PHA培养液培养,在体外便可获得丰富的含有丝分裂的生长活跃的细胞群体,利用秋水仙素终止分裂中期的淋巴细胞,提供后续检验样品。
血球细胞核型分析是用于鉴别染色的有无异常状况。淋巴细胞通常不会进行细胞分裂,但在分裂素存在下,淋巴细胞会进行有丝分裂与染色体复制。在48~72小时以后,加入有丝分裂抑制剂可以细胞分裂停止于转位期。经过低张溶液、固定与染色,可以用显微镜观察染色体是否有异常状况。
【适应范围】外周血淋巴细胞体外增殖培养。
【储存条件及有效期】
培养基应贮存在-20℃,有效期为2年,溶解后应存放于2-8℃,并于10天内使用。存放时注意避光。
【生产日期与失效日期】详见产品标签
【使用仪器】显微镜、二氧化碳细胞培养箱
【样本要求】
采血前不宜做剧烈运动。
可用干燥管、肝素抗凝管采血加塞送检。
避免采用溶血、乳穈状样品。
【检验方法】
接种大约0.5毫升的肝素处理全血到5毫升外周血培养基中。
于37°C培养69~72小时。
加入0.05毫升的秋水仙酰胺溶液(Cat.No.12-004-1),继续于37°C培养20~30分钟。
以1500RPM离心7分钟收取血球细胞。
去除上清液,并将细胞悬浮于10毫升37°C低张0.075M氯化钙溶液中,继续于37°C培养15分钟。
缓慢加入1毫升冰的固定液(醋酸:甲醇=1:3)轻轻摇晃混匀。
以1500RPM离心7分钟收取血球细胞。
去除上清液,敲散细胞。缓慢加入5毫升冰的固定液(醋酸:甲醇=1:3)轻轻摇晃混匀。
以1500RPM离心7分钟收取血球细胞。
去除上清液,敲散细胞。再一滴一滴地加入5毫升冰的固定液(醋酸:甲醇=1:3),于4°C静置20分钟。
以1500RPM离心5分钟收取血球细胞。
去除上清液,敲散细胞。将细胞悬浮于0.5~1毫升的冰的固定液中,再滴一滴细胞悬浮液到干净的载玻片上,风干玻片后进行染色。
染色体染色可使用Orecin或Giemsa染色。Giemsa banding(G-Banding)是目前最常用的染色方法。可以使用胰酶-EDTA 10X(Cat.No.03-051-5)处理玻片再进行后续染色步骤。
【参考值(参考范围)】细胞倍增指数大于1.5
【检验结果的解释】细胞培养时间、加入秋水仙素的量以及低渗操作时间对结果影响较大,如发现制片所得的分裂相较少,需要对实验条件及样品进行确认。
【检验方法的局限性】仅用于外周血淋巴细胞培养。
【产品性能指标】
装量差异限度:±3%
澄清度:澄清
PH值:7.2-7.6
渗透压(mOsm/kg):280-340
内毒素(EU/ml):<10
细胞生长实验:细胞倍增指数大于1.5
【注意事项】
本品仅用于体外诊断,不用于临床治疗,严禁内服,不能用嘴吸液。
试剂包装如有破损,严禁使用。
操作过程应避免污染。
操作人员在检验时应做好防护,预防血液病传播。
操作人员万一与皮肤、粘膜接触,请立即用自来水冲洗。
溶液应为澄清,如有沉淀物,严禁使用。
禁止使用超出规定有效期的产品。
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