MSCgo™成骨诱导分化试剂
产品描述
MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium间质干细胞成骨诱导分化培养基,无血清,无异源,即用型完全培养基,诱导hMSC分化为成熟成骨细胞。适用于不同来源的hMSC,如骨髓、脂肪组织和脐带组织(hMSC-BM,hMSC-AT,hMSC-CT)。
MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium 10天以内快速诱导成骨,而MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium需要14-21天。
成骨结果
hMSC分化成骨后会矿化形成钙结节且有钙分泌,所以可以利用茜素红S (Alizarin Red S) 染色检视分化的成骨细胞。不同的细胞来源(类型、年龄、代数)所得到的分化效果会有差异
试剂盒组成
MSCgo™间质干细胞成骨诱导分化培养基
产品描述 |
储存 |
货号 |
规格 |
MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium |
2-8°C |
05-440-1B |
100ml |
MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium |
2-8°C |
05-442-1B |
100ml |
成骨实验所需材料
维持培养基
MSC NutriStem® XF Medium: BI;05-200-1,05-201-1
MSC Attachment solution XF: BI;05-752-1,05-760-1
注:若是血清体系、血小板体系或其他MSC培养体系也可以使用。
分化培养基
MSCgo™ Osteogenic Differentiation Medium:BI;05-440-1
MSCgo™ Rapid Osteogenic Differentiation Medium:BI;05-442-1
染色试剂
建议使用Vivacell品牌,间充质干细胞成骨分化染色试剂盒,货号:C37C0-0150。
成骨诱导分化操作
1 接种hMSC:用MSC Attachment solution (BI;P/N: 05-752-1,1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘,每孔加入0.5ml MSC NutriStem® XF,接种6x104细胞 (3x104 cells/cm2)。
此处仅为针对成骨诱导的细胞接种操作,MSC NutriStem® XF Medium详细操作步骤请参考其说明书。
若使用血清体系、血小板体系或其他MSC培养体系,可以略过包被步骤。
2 置于37°C,5% CO2细胞培养箱中培养。
以成骨分化培养基诱导分化
1 培养24h后确认细胞融合度达到80-90%,将维持培养基吸除,每孔(24孔盘)加入0.5ml分化培养基。
若细胞融合度<80%,继续再培养一天。
2 置于37°C,5% CO2培养箱中培养10-21天,每2-3天换液。
培养时间越长,会有越多矿化的细胞,ARS染色更明显。
3 成骨评价:使用2%的ARS染色液。
染色步骤
间充质干细胞成骨分化染色试剂盒 英文名称:MSC Osteo-Staining Kit
【预期用途】
适用于间充质干细胞成骨分化后的骨细胞染色,尤其适合作为BI MSCgoTM Osteogenic XF ( BI 05-440-1B 或 05-442-1B) 成骨分化后的染色验证之用。
【检验原理】
茜素红S (Alizarin Red S)是一种常用的示钙染剂,广泛用作生物医学样本中含钙目标物的染色检验。游离的钙离子可与茜素红S形成红色沉淀;固着的钙则会被直接染成红色。
在成骨诱导分化作用下,间充质干细胞 (MSC, Mesenchymal Stem Cell) 会被逐渐分化为骨细胞(Osteoblasts),包括钙化骨节(钙盐结晶体)的形成 (Calcium nodules formation) 和细胞的泌钙反应 (Calcium secretion)。两者均可被茜素红S染成红色。
【检验方法】
以操作一个T25 flask为例:
1. 吸弃分化培养基,加入1 ml DPBS (BI 02-023-1ACS) 轻轻润洗培养瓶底面。
2. 吸弃DPBS,加入3 ml Fixation solution (C37C10020),轻轻晃动培养瓶,使底面浸润均匀。室温下静置30 分钟。
3. 吸弃Fixation solution;加入3 ml Wash I (C37C20050),润洗细胞2-3次。
4. 吸弃Wash I,加入3 ml Staining Solution (C37C30020),底面浸润均匀,室温染色30分钟。5. 吸弃Staining Solution,加入3 ml Wash II (C37C40050),润洗细胞2-3次。
6. 吸弃Wash II,加入1 ml Inspection Solution (C37C50010),置于显微镜下观察、拍照 (分化后的骨细胞会被染成橘红色)。
【检验结果的解释】
在显微镜下,可观察到钙化骨节与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色(如下图所示)。被染色细胞的数量和染色的深度会受到多种因素的影响,例如:细胞类型、细胞代数、分化时间和培养条件等。
产品官网链接:https://www.bioind.com/worldwide/mscgo-osteogenic-differentiation-medium/
规格:100ml
产品名称:MSCgo™间充质干细胞成骨/快速成骨诱导分化试剂
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