MSCgo™成软骨诱导分化试剂
产品描述
MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Medium间质干细胞成软骨诱导分化培养基,无血清,无异源成分,即用型,适用于不同来源的hMSC,如骨髓、脂肪组织和脐带组织(hMSC-BM,hMSC-AT,hMSC-CT)。
成软骨结果
hMSC成软骨分化,细胞会聚集形成3D球状,同时伴随细胞外基质有蛋白聚糖 (Aggrecan) 富集的情形。所以可用Alcian Blue(深蓝色的含铜染料)染色检验蛋白聚糖,作为成熟软骨形成的指标。不过染色的强度会因不同hMSC来源(类型、年龄、代数)而有差异。
试剂盒组成
MSCgo™间质干细胞成软骨诱导分化培养基
产品描述 |
储存 |
货号 |
规格 |
MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Basal Medium |
2-8°C |
05-220-1B |
100ml |
MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Supplement Mix |
-20°C |
05-221-1D |
10ml |
完全培养基配制
1 室温下解冻Supplement Mix。
2 以1:10将Supplement Mix稀释进Chondrogenic Basal Medium(如:10ml Supplement Mix+90ml Basal Medium)。
3 完全培养基可在2-8°C储存一个月。
成软骨实验所需材料
维持培养基
MSC NutriStem® XF Medium: BI;05-200-1,05-201-1
分化培养基
MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Medium:05-220-1B, 05-221-1D
96-well U-bottom, non-tissue culture treated plate (for suspension)
染色试剂
建议选择Vivacell品牌,间充质干细胞成软骨分化染色试剂盒,货号:C37B0-0150。
成软骨诱导分化操作
以维持培养基接种hMSC
1. 细胞以1x105/(10µl培养基)接种进1孔U底的96孔盘(非TC-treated)置于37°C,5% CO2细胞培养箱2小时后 (促进细胞聚集成团),小心加入0.1ml培养基。
小微团的培养方式有助于球状细胞团形成
2. 置于37°C,5% CO2细胞培养箱,继续培养。
以成软骨分化培养基诱导分化
1. 培养24小时后,将维持培养基吸除,每孔(96孔盘)加入0.2ml分化培养基
球状细胞团会在24-48小时形成
2. 置于37°C,5% CO2细胞培养箱中培养14-21天;期间每3-4天更换一次分化培养基。
注意:培养时间长,可以得到更多成熟的软骨细胞(Alcian Blue染色强度更大)。
【检验方法】
以操作一个T25 flask为例:
1. 吸弃分化培养基,加入1 ml DPBS (BI 02-023-1ACS) 轻轻润洗培养瓶底面。
2. 吸弃DPBS,加入3 ml Fixation solution (C37B10020),轻轻晃动培养瓶,使底面浸润均匀。室温下静置30 分钟。
3. 吸弃Fixation solution ;加入3 ml Wash I (C37B20050),润洗细胞,静置2-3分钟。
4. 吸弃Wash I,加入3 ml Staining Solution (C37B30020),底面浸润均匀,室温避光染色过夜。
5. 吸弃Staining Solution,加入3 ml Wash II (C37B40050),润洗细胞。
6. 吸弃Wash II,重复第5步,再次漂洗细胞(如若上清依然很蓝,可延长漂洗时间或再漂洗一次。注意:不要把细胞冲下来)。
7. 吸弃Wash II,加入1 ml Inspection Solution (C37B50010),置于显微镜下观察、拍照。
产品官网链接:https://www.bioind.com/worldwide/chondrogenic-differentiation-media/
规格:100ml
产品名称:MSCgo™间充质干细胞成软骨诱导分化试剂
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