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      外泌体研究之细胞鉴定

      近年来细胞外囊泡(extracellular vesicle)研究热度持续升温,关于细胞外囊泡的报道层出不穷,在多个领域也都涌现了重大的研究进展。如近期发表在Nature上的研究表明外泌体PD-L1可介导免疫抑制,预测PD-1单抗的疗效。细胞外囊泡研究的临床转化应用也在如火如荼进行,不断有基于细胞外囊泡的产品问世,如Exosome Diagnostics公司用于前列腺癌诊断分级的产品EPI(ExoDx® Prostate (IntelliScore))。

      由欧洲多国细胞外囊泡领域的学者发起并成立的国际细胞外囊泡协会于2014年在会刊Journal of Extracellular Vesicles发表了一个指导性意见,即《MISEV2014》,并于2018年发布了新版本的《指导要求》,即《MISEV 2018》。

      新版指导要求《MISEV 2018》对细胞外囊泡命名规则,适用的样本来源,文章发表中分离及鉴定各种方法的要求以及对EVs承载物质的定量等规范真的是事无巨细。




      《MISEV 2018》在描述收集和预处理过程中需要注意的可控变量中,有注明所有细胞研究都建议采取一些预防措施,如定期确认细胞身份(短串联重复序列STR分析或其他方法),鉴定细胞品系和来源。






      另外需要定期检测支原体、微生物污染,不仅因为污染对细胞的影响,还有污染物也会分泌细胞外囊泡(EVs)
      STR: 短串联重复序列(short tandem repeats,STR)也称微卫星 DNA(microsatellite DNA), 通常是基因组中由1~6个碱基单元组成的一段DNA重复序列,由于核心单位重复数目在个体间呈高度变异性并且数量丰富,构成了STR基因座的遗传多态性。一般认为人类基因组平均每15 kb就存在一个STR基因座。

      人类基因组DNA中平均每6~10kb就有一个STR位点,其多态性成为法医物证检验个人识别和亲子鉴定的丰富来源。不同人体基因组卫星DNA重复单位的数目是可变的,因此,形成了极其复杂的等位基因片段长度多态性。


       
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      纯合子:Homozygote,指同源染色体在同 一基因座上的两个等位基因相同。
      杂合子:Heterozygote,指同源染色体在同 一基因座上的两个等位基因不相同。

      由于STR具有种类多、分布广泛,突变率低,多态性程度高,等位基因多,鉴别能力强(在每个STR 位点上, 多有几个或几十个等位片段),灵敏度高等特点,广泛应用于遗传制图、法医学鉴定、亲属关系分析(特别是亲子鉴定)、疾病基因定位、物种多态性和遗传病的诊断等诸多领域。

      美国FBI利用13个STR基因位点加性染色体位点制作一个“联合DNA索引系统(CODIS)”的全国性DNA数据库,应用到犯罪鉴定与法医学鉴定。

      在细胞生物学研究领域,STR分型检测已被ICLAC、ATCC 等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定 


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      ▼细胞STR鉴定正常图谱


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      ▼如发生细胞交叉污染现象,基因组出现多等位基因


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      逍鹏生物DrCell实验室采用细胞鉴定金标准STR法进行细胞鉴定工作。对人源细胞21个基因座进行检测,所选用的基因座不仅包含ATCC、DSMZ和JCRB细胞库中的基因座,更添加12个高度多态性位点,可方便与权威数据库进行比对,具有极高的准确性。

      详情查阅:细胞STR鉴定

      Ref
      1. Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines. Journal of Extracellular Vesicles, 2018, Vol. 8, 1535750
      2.  American Type Culture Collection Standards Development Organization Workgroup,A.S.N., Cell line misidentification: the beginning of the end. Nat Rev Cancer, 2010. 10(6):p. 441-8.
      3. American Type Culture Collection Standards Development Organization Workgroup,A.S.N., Authentication of Human Cell Lines: Standardization of STR Profiling. 2011,ANSI/ATCC ASN-0002-2011.

      2019年4月16-17日逍鹏生物参加第三届全球CAR-TCR细胞治疗亚洲峰会
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      2019年05月10日

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