Hydrogel Formation and Preparation Protocols(中文FAQ)
Q VitroGel中的凝胶是如何起作用的?
A 当VitroGel与细胞培养基混合时,水凝胶开始形成。水凝胶分子将与来自细胞培养基的离子分子(如Ca2+或Na+)相互作用,以诱导基质结构(水凝胶)。对于3D培养操作,水凝胶的形成分为两个阶段:a)软水凝胶的形成,b)水凝胶的稳定。
1.软水凝胶形成:当使用少量细胞培养基时,水凝胶形成过程缓慢。在这个阶段,水凝胶是柔软的,具有剪切变薄和快速恢复的机械性能,这使得水凝胶可以在体内注射。缓慢的水凝胶形成过程和柔软水凝胶的可注射性能为水凝胶从混合管轻松转移到细胞培养板创造了时间框架。
2.水凝胶稳定:在软水凝胶形成后,在水凝胶顶部添加额外的细胞培养基将使更多的离子分子穿透水凝胶基质,并进一步使水凝胶交联饱和。在这个过程中会形成固体水凝胶。
Q 如何调整水凝胶形成时间?
A 调节VitroGel溶液和细胞培养基之间的混合比例将改变水凝胶的形成速率。
如果水凝胶在与培养基混合后固化过快(显示为小的固体凝胶块),则通过使用较少的细胞培养基来调整混合比例。例如,如果将2mL水凝胶溶液与0.5mL细胞培养基混合导致固体凝胶卡盘(颗粒),则将2mL稀释的水凝胶溶液与0.2-0.4mL细胞培养液混合将有助于解决该问题。
另一方面,如果水凝胶形成太慢,则通过使用更多的细胞培养基来调整混合比例。例如,如果将2mL稀释的水凝胶溶液与0.5mL细胞培养基混合导致水凝胶形成缓慢,则将2mL稀水凝胶溶液与1-2mL细胞培养基的混合将有助于解决该问题。
Q 将VitroGel溶液与细胞培养基混合时,能做些什么来防止气泡形成?
A 气泡问题与将凝胶溶液与细胞培养基混合后溶液粘度增加有关。以下是一些有助于减少气泡形成的建议:
1.将VitroGel溶液加热至37℃,以降低凝胶的粘度。
2.将VitroGel溶液与细胞培养基轻轻混合。然后,缓慢移液,不要引入气泡。
3.快速旋转混合管以去除气泡。
Q 可以在VitroGel中添加细胞外基质蛋白或其他分子化合物吗?
A 可以。细胞外基质蛋白或其他分子化合物可以加入到VitroGel系统中。在水凝胶形成之前,将蛋白质或分子化合物加入细胞培养基中,然后直接与VitroGel 3D水凝胶溶液混合。请注意,水凝胶的形成时间和最终凝胶硬度可能会因蛋白质或化合物中所含的盐而发生变化。如果您对在VitroGel系统中添加额外的化合物有任何疑问,请联系我们。
Q 为什么水凝胶松散地粘附在组织培养板上?
A 这个问题可能是由于以下原因:
1.使用未经处理的组织培养板,其具有更疏水的表面。这减少了水凝胶/细胞在孔板表面上的附着。为了获得更好的性能,我们建议使用经过处理的含有VitroGel的组织培养板。
2.添加水凝胶作为圆顶而不是覆盖孔板的整个底部也可能导致这个问题。我们建议在添加水凝胶后轻轻倾斜和旋转孔板,以确保孔板的整个底部被凝胶覆盖。
3.在水凝胶顶部添加额外的培养基之前等待的时间不够长。将水凝胶转移到孔板后,请等待10-30分钟进行水凝胶稳定,然后再添加顶部培养基。在水凝胶稳定之前加入介质会破坏水凝胶的结构。水凝胶的浓度越低,所需的等待时间就越长。
4.在最初的软水凝胶形成后,在添加覆盖介质之前,确保水凝胶稳定并附着在孔板的底部是至关重要的。如果水凝胶不稳定,在添加覆盖介质后,它可能会从井底分离。在水凝胶形成过程中,凝胶是柔软的;不要摇动平板或垂直放置平板。保持平板水平。
Q 可以进行圆顶培养吗?
A 不建议将水凝胶添加为圆顶形状。圆顶形状可能不会粘在培养板的底部用于长期培养。水凝胶应该覆盖孔板的整个底部。我们建议在添加水凝胶后轻轻倾斜/旋转孔板,以确保凝胶覆盖孔板的整个底部。使用96孔板可以将水凝胶的使用体积减少到30-75µL/孔。当添加覆盖培养基来喂养细胞时,分子渗透没有问题。
Q 可以使用VitroGel无血清培养基吗?
A 可以的,无血清培养基适用于VitroGel。
Q 是否可以用细胞培养基代替稀释溶液稀释VitroGel水凝胶?
A 对于高浓度水凝胶,不推荐使用。离子分子在培养基中的浓度将远高于稀释溶液,因此用细胞培养基稀释VitroGel可能会导致凝胶形成过快且过粗。我们建议使用VitroGel稀释溶液来调整高浓度的VitroGel。
或者,对于那些不想稀释、只想直接将水凝胶与细胞悬浮液混合的科学家来说,VitroGel水凝胶基质(Cat#VHM01)是一个更好的选择。
Q 应该以多快的速度将样品从混合管转移到培养板上?
A 与细胞培养基混合后,建议在10分钟内将混合物转移到组织培养板中。水凝胶的形成在将VitroGel溶液与细胞培养基混合后开始。
如果您有多个具有不同水凝胶条件或细胞类型的样品要制备,我们建议在将水凝胶与样品2的细胞培养基混合之前,将样品1的混合物转移到组织培养板上。
Q 可以把凝胶混合物放在培养箱里,而不是放在室温下稳定凝胶吗?
A 可以的。把凝胶混合物放在培养箱里而不是室温下是可以的,但需要注意,凝胶在培养箱中的形成速度比室温下要慢一些。因此,对于浓度较低的凝胶,您需要将其在培养箱中保存更长时间。然而,对于更高浓度的凝胶或VitroGel水凝胶基质,这不是问题。
Q 可以预包被培养板以增加水凝胶附着吗?
A 尽管在大多数情况下,不需要对培养板进行预包被,但用1X PBS或10-100 mM CaCl2对培养板涂覆可以改善水凝胶的附着性。请参考以下用于涂布培养板的方案:
1.加入PBS或CaCl₂ 溶液到培养板中静置30分钟。
2.去除PBS或CaCl₂ 溶液,在加入水凝胶之前,打开生物安全罩下的盖子10-20分钟。对于不同尺寸的培养板,PBS或CaCl2的推荐体积,如下表1所示。
表1:PBS或CaCl2的推荐体积预包被培养板解决方案
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