Cell Preparation and Culture on VitroGel(中文FAQ)
Q 如何制备细胞悬浮液以混合水凝胶?应该加血清吗?
A 细胞可以在常规的完全细胞培养基中制备,并直接与VitroGel混合。如果你想调整血清或其他关键补充剂在
最终水凝胶中的浓度,请遵循以下步骤:
如果细胞在补充了10% FBS或其他关键补充剂的完整细胞培养基中培养,请在将细胞悬浮液与水凝胶溶液混合之前,使用以下方法制备细胞悬浮液。
1、制备具有2X浓度(例如100K)的细胞悬浮液,并以1:1(v/v)的比例与100% FBS混合,得到具有50% FBS的1X细胞悬浮液(例如50K)。
2、将VitroGel水凝胶溶液与来自上面的细胞悬浮液以4:1(v/v)的比例混合,以在10K下获得水凝胶中的最终细胞,含10% FBS。
注意:不要制作2X(或更高)浓度的介质。介质中的离子分子会影响水凝胶的形成。高浓度的培养基可能使凝胶变粗或不均匀。
水凝胶中的血清或关键补充剂会影响细胞生长,尤其是在最初的48小时内。请参见下面的示例图。
在含有2%和10%FBS的VitroGel LDP3中3D培养的骨髓细胞(OP9)。将细胞包封在水凝胶基质中,最终FBS浓度分别为2%和10%。这些图像是在细胞接种后18小时拍摄的。
Q 应该使用多少细胞密度接种?
A 可以基于不同的细胞类型来优化最终的细胞浓度。我们建议制备以下浓度的细胞悬浮液:
1、 3D细胞培养:5-2 x 10^6个细胞/mL(细胞悬浮液需要与VitroGel溶液以4:1的比例混合(VitroGel溶液:细胞悬浮液以4:1 v/v),这使得水凝胶中的最终细胞浓度为1-4 x 105个细胞/mL.)。
2、2D水凝胶涂层:1-5 x 105个细胞/mL。
Q 3D培养需要多久更换一次覆盖培养基?
A 通常,我们建议每隔一天更换一次覆盖培养基,类似于常规的2D细胞培养。然而,这取决于实验的需要。有些实验可能需要每24小时更换一次,有些实验可能不需要,整个星期更换一次。如果你对此不确定,请与我们联系。
Q 应该全部还是部分更换覆盖培养基?
A 更换100%的覆盖培养基可能会导致水凝胶破裂。建议在第一次更换培养基时,在不去除顶部培养基的情况下添加额外的新鲜培养基。然后,更换50-80%的覆盖培养基。(请检查下表中额外覆盖培养基的推荐容量。)
Q 有可能用VitroGel覆盖细胞球体并在其上应用分化培养基吗?
A 可以的,上面的培养基可以穿透水凝胶。
Q 细胞能否在水凝胶基质中移动(迁移/入侵)?
A 可以的,在3D培养和2D水凝胶涂层培养中都可以观察到细胞在VitroGel上的流动性。球体侵入试验、伤口愈合试验或3D细胞迁移可以用VitroGel进行。
Q 在VitroGel中生长的细胞可以传代培养吗?
A 可以的,可以通过使用VitroGel细胞回收溶液从VitroGel系统中回收细胞,并通过使用新鲜的VitroGel再培养一段时间。
Q 如何使用VitroGel进行共培养或三明治培养(逐层)?
A 两种或多种不同细胞类型的共培养可以用VitroGel系统进行。除了将不同的细胞类型与水凝胶溶液一起加入共培养外,每种细胞类型也可以与水凝胶溶液混合并逐层加入。在第一层水凝胶变得稳定后,小心地将第二层细胞/水凝胶混合物覆盖在第一层细胞/凝胶的顶部。
Q 水凝胶中球体形成需要多长时间?
A 通常,在水凝胶系统中培养后,球状体的形成需要约3-10天。形成时间可以根据不同的细胞类型而变化。小细胞聚集(菌落形成)可能在一夜之间发生。
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